二氧化碳培养箱污染及防治措施

二氧化碳培养箱的常见污染

进入二氧化碳培养箱培养环境时，对细胞存活有害的成分和导致细胞不纯的外来物质应视为污染。不同的污染物对细胞的影响是不同的，有些是长期的、缓慢的、潜在的，有些则可以在短时间内抑制细胞生长或杀死细胞。根据污染源的不同，可分为生物污染、化学污染、物理污染和气溶胶污染。

1、生物污染：

这是最常见也是最有害的污染。如细菌、病毒、真菌、支原体等。这些污染源可能是人为带入的，也可能是细胞放入二氧化碳培养箱之前就被污染了，或者是盒子本身没有消毒。体外培养的细胞没有抗污染能力，培养基中添加的抗生素抗微生物污染的能力有限，所以一旦发生细胞的微生物污染，往往无法挽救。

2、化学污染：

二氧化碳培养箱中的许多化学物质会导致细胞污染。比如细胞培养容器清洗过程中残留的清洁剂、加湿器中未净化的水、人为带入的液体或气体都可能是化学污染源。不同的化学物质对细胞的污染不同，有些可能促进或抑制细胞生长，有些甚至可能杀死细胞。

3、物理污染：

培养环境中的物理因素，如温度、辐射、振动、辐射(紫外线或荧光)都会对细胞产生影响。物理污染往往被人们所忽视，它主要在代谢水平或分子水平上影响细胞的正常生理过程。

4、气溶胶污染：

气溶胶是液体或固体颗粒均匀悬浮在气体介质中的分散体系。当粒子是微生物时，就是微生物气溶胶。如果微生物是病原性的，那就是病原性微生物气溶胶。细菌、病毒和其他病原体可以通过气溶胶在人与人之间、人与环境之间传播。

二氧化碳培养箱污染防治措施

1、选择二氧化碳培养箱：

二氧化碳培养箱的生产厂家设计了多种不同的装置来减少和防止污染，主要是防污染设计和消毒灭菌系统的改进，以达到消毒灭菌的目的。如二氧化碳培养箱带紫外线消毒功能、二氧化碳培养箱带HEPA过滤器净化空气、二氧化碳培养箱带高温杀菌等。后者又可分为高温干热和高温湿热。这些设备的杀菌能力不同，紫外线灯的消毒范围有限。离灯具越远或被遮挡，消毒能力越差。

HEPA滤网孔径有限，无法去除病毒和一些微小细菌，容易磨损，但也有其局限性。相比较而言，高温灭菌是一种有效的方法。但高温干热和高温湿热也是有区别的，不同方法的杀菌效率与温度有直接关系。

2、培养员工习惯：

人的因素和态度可以对环境、人和事物产生积极或消极的影响。为了安全起见，实验室的工作人员应该了解他们的态度和人为因素对实验环境的重要性。因此，实验室工作人员的专业培训在污染预防中起着重要的作用。

3、注重管理：

细胞室的二氧化碳培养箱要有专人管理，系统要定期校正，至少一年一次。数值一旦固定，不要随意调整，以免影响箱内温度、湿度、CO2浓度的波动，降低机器的灵敏度，也影响二氧化碳培养箱中的细胞生产状态。

使用前应对二氧化碳培养箱的各项指标进行系统校正，使用前对箱体及内部进行消毒，数值应稳定一段时间。一旦发生紧急情况，应及时报告。专业人员操作，立即采取措施，避免不必要的损失。

4、标准化操作：

二氧化碳培养箱的使用很简单，但也需要标准化。进入细胞室必须穿实验服、拖鞋或一次性鞋套。实验过程中必须佩戴一次性手套，尤其是在打开二氧化碳培养箱之前。打开二氧化碳培养箱前必须用75%酒精喷壶洗手，然后取出细胞培养瓶或培养板。在显微镜下查看细胞培养瓶或培养板后，再放回二氧化碳培养箱，喷酒精消毒。

二氧化碳培养箱的两个门开关取(放)东西要快，不能长时间开着，否则会影响CO2的浓度、温度、湿度，造成污染。特别是不要忘记关上内层的玻璃门。切记开门时不要和二氧化碳培养箱、呼吸、打喷嚏。

5、加强保护：

如果实验者患病并携带病菌，进入细胞室前应戴口罩，但病情严重者不宜进行实验。在实验过程中，应梳理女性的头发，以防止头皮屑污染和相关事件。如果实验室条件允许，每人可以佩戴实验帽、手套和口罩，防止污染二氧化碳培养箱并保护实验者本人。

6、注意保养：

二氧化碳培养箱放在电池室内，应保持干燥，环境温度不超过30℃(建议保持在18℃-30℃)。二氧化碳培养箱远离门窗、暖气设备和空调管道，不能直接暴露在阳光下。二氧化碳培养箱的桌面必须水平防震，由不燃材料制成，不能靠在墙上或类似建筑物上。后部电源接头与墙壁之间应至少留出30厘米的空间。一旦放好，就不应该再动了。

7、矫正治疗：

二氧化碳培养箱放好后，对箱体和内部进行消毒，并系统校正各项指标，数值稳定一段时间后再使用。CO2气体对健康有害，因此应在电池室内安装足够的通风设备。空气中的粉尘气溶胶容易造成二氧化碳培养箱的污染，所以需要一个循环的空气环境。将二氧化碳培养箱的管理任务分配给有经验的检查员是非常重要的。如果长时间不使用二氧化碳，应关闭CO2开关，以防止CO2调节器失效，并避免给实验室带来安全事故。